梅毒病程长，症状复杂，与很多非梅毒性疾病的表现有相似之处，因此必须结合病史、临床表现及实验室检查结果，进行综合分析，必要时还须进行家属调查，追踪观察和试验治疗，以便作出正确诊断。
（一）病史有无婚外性乱史（包括时间、性伴侣性病情况）。现病史及既往曾否患过硬下疳、二期、三期梅毒，或患过其它性传播疾病。配偶有无梅毒及性传播病史。有无早产、死产史、疑为先天梅毒应询问其父母的性病史及兄弟姊妹的健康状况。是否接受过抗梅毒治疗（药物及剂量）。
（二）体检 应作系统全面检查，早期应注意检查皮肤、粘膜，特别是掌跖、阴部、肛门等处。晚期除注意皮肤粘膜外，还应注意心血管和神经系统。
（三）实验室检查
1．梅毒螺旋体检查 适用于早期梅毒皮肤粘膜损害，如硬下疳、湿丘疹、扁平湿疣等。其中硬下疳尤为重要，因梅毒血清反应在硬下疳出现2～3周始呈阳性。
（1）暗视野检查：为最常应用的螺旋体检查方法，其原理为在装有暗视野集光器的显微镜下，视野中无直接光线，光只能从四周透入，当接物镜下无物体存在时，视野始终保持黑色，当有物体时，则从四周透人的光线射到物体上，物体将光线折射在目镜方向而发生光亮，从而观察到螺旋体的形态及运动特征。
（2）直接荧光抗体检查法：取患者皮损疮面血清，干燥后加兔抗人梅毒螺旋体荧光抗体，其原理为疮面血清中梅毒螺旋体与兔抗人梅毒螺旋体发生特异性结合，在荧光显微镜下观察，可见梅毒螺旋体呈亮绿色荧光，其它种类螺旋体不发光，此法特异性高，也可用于口腔梅毒损害的检查，但缺点为敏感性差。
（3）涂片染色检查法：可用镀银染色法，螺旋体染成棕黑色，背景为黄色。
2．梅毒血清学试验 为诊断梅毒必需的检查方法，对潜伏梅毒，患者血清学的诊断尤为重要。梅毒螺旋体感染人体后，可产生两种抗体。非特异性的抗心脂质抗体，可用牛心脂质检测出，称非梅毒螺旋体抗原血清反应（梅毒螺旋体蛋白+人脂质抗原 一 抗心脂质抗原 一抗心脂质抗体十心脂质抗原 一 非螺旋体抗原梅毒血清反应）；抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体（活的或死的梅毒螺旋体或其成分）检测出来，称梅毒螺旋体抗原血清反应（梅毒螺旋体特异抗原-一刺激机体 一 抗梅毒螺旋体抗体十梅毒螺旋体抗原 一 螺旋体抗原梅毒血清反应）。非螺旋体抗原血清反应为非特异性梅毒血清反应，不是梅毒的特异性反应，但大多数梅毒患者可发生此种阳性反应，方法简便；敏感性高，故可作为常规试验及筛选试验。此外可作定量试验，用于疗效观察。复发或再感染的判断。
常用的非螺旋体抗原血清反应有：①性病研究室玻片试验（venereal disease laboratory slide test，VDRL）；②血清不加热反应素试验（unheated serum reagin，USR）；③快速血浆反应素环状卡片试验（rapid p1asma reagin circle card test，RPR）等。螺旋体抗原梅毒血清反应敏感性及恃异性均高，用作证实试验，判断非梅毒螺旋体试验阳性的真假性。缺点为此项试验费用高，需较高的设备条件，而且即使患者经足够的抗梅毒治疗后，血清反应亦不阴转或降低，故不适用于疗效观察、复发及再感染的判断。
常用的螺旋体抗原血清反应有：①荧光螺旋体抗体血清试验（fluorescent treponema1 antibodyabsorption test，FTA-ABS test）；②梅毒螺旋体血凝试验（treponema pallidum hemagg1utination assay，TPHA）；③酶联免疫吸附试验（ELISA）等。临床上诊断或怀疑梅毒时，一般先用非螺旋体抗原血清反应（USR或RPR）作筛选检查，如果阴性，即可否定梅毒，只有在怀疑梅毒才作进一步检查。如果为阳性，且病史及体检符合梅毒者，即可以确定诊断。病史及体检不符合梅毒者，应进一步作梅毒螺旋体血清反应，如FTA-ABS试验，以除外生物学假阳性反应。
3．脑脊液检查 以除外神经梅毒，检查项目包括细胞计数、总蛋白测定、VDRL试验及胶体金曲线。
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